老司机免费福利视频_热久久免费视频_性一交一乱一伦一色一情孩交_97热在线精品视频_国产性AV_欧洲熟妇精品视频_香蕉视频一直看一直爽_AC在线精品_国产精品一区二区丝袜的背景故事_超碰偷拍_黄色网址免费在线观看_久久66视频_亚洲精品一区人人爽_胸大美女又黄的网站_宿舍4攻1受把腿张开男男视频

咨詢熱線
15800446246
產(chǎn)品目錄
您的位置： 網(wǎng)站首頁 > 技術(shù)文章 > 支原體PCR檢測試劑盒的操作步驟

支原體PCR檢測試劑盒的操作步驟

發(fā)布日期： 2017-01-06
瀏覽人氣： 2898
    支原體PCR檢測試劑盒中含有PCR反應(yīng)所需要各種試劑組分，如：引物、dNTPs、緩沖液、Taq酶、穩(wěn)定劑等。PCR反應(yīng)液中加入檢測樣品和Taq酶，即可進行PCR擴增反應(yīng)。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳染色判斷，陽性樣本將在290bp處出現(xiàn)特異性條帶。
    1.收取待檢樣品（貼壁細(xì)胞：細(xì)胞生長至80％左右即可，送檢細(xì)胞不能用消化液消化細(xì)胞，可以使用細(xì)胞刮刀刮取細(xì)胞；懸浮細(xì)胞：細(xì)胞生長至80％左右即可），取150ul（約1～3×105細(xì)胞數(shù)）至離心管，沸水浴10min 。 
    2.將煮沸過的細(xì)胞懸浮液12000rpm離心2-5min。 
    3.取上清4ul作為PCR反應(yīng)模板。 
    4.充分融化PCR反應(yīng)液，按下列表格配制反應(yīng)混合液，并以21ul/管分裝至PCR反應(yīng)管中。
    5.每個PCR反應(yīng)管中加入處理好的樣品4ul,DNA陽性對照和陰性對照各加入4ul/管。 
    6.將所有PCR反應(yīng)管放入PCR儀，參照以下參數(shù)運行PCR儀。
    7. 取5ul PCR擴增產(chǎn)物，在1%瓊脂糖凝膠上直接點樣（注：無需再加溴酚藍，擴增產(chǎn)物已包含溴酚藍），120V電泳20分鐘（可根據(jù)電泳儀的情況，適當(dāng)調(diào)整參數(shù)）。 
    8. EB染色觀察。